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021-54845833/15800441009
產品簡介
產品名稱 ：小鼠脈絡膜微血管內皮細胞
產品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：脈絡膜組織
產品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
小鼠脈絡膜微血管內皮細胞分離自眼球脈絡膜組織。脈絡膜在視網膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細胞，對外力沖擊的耐受性較視網膜差，當眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時，堅硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡膜在內外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。
脈絡膜呈暗褐色，圍繞視神經乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。
脈絡膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。
同時對視覺系統(tǒng)起保護作用，對整個視覺神經有調節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細胞，有營養(yǎng)和遮光作用。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的小鼠脈絡膜微血管內皮細胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法、最后通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的小鼠脈絡膜微血管內皮細胞經C D 31免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml) ，明膠(0. 1%)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：內皮細胞樣
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
小鼠脈絡膜微血管內皮細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
小鼠脈絡膜微血管內皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內皮細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm ，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min (或4℃冰箱靜置5-7min) 。消化完向離心管內加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 經1000rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(補加1% FBS，促進貼壁) 重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預熱) 。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
