ELISA是實(shí)驗(yàn)室里一項(xiàng)最基本的免疫檢測技術(shù)，被廣泛應(yīng)用科研、醫(yī)療、食品和環(huán)境等領(lǐng)域。面對(duì)市場琳瑯滿目試劑盒及數(shù)百家供應(yīng)商，對(duì)于剛進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的新手或者準(zhǔn)備開展ELISA實(shí)驗(yàn)人員，如何選擇一款合適的ELISA試劑盒呢？下面我們從elisa類型、實(shí)驗(yàn)物種及待檢樣品、樣品中檢測物水平、樣本可獲得性、試劑盒關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)和預(yù)算。

  目錄：

  1.ELISA類型

  2.實(shí)驗(yàn)物種及待檢樣品

  3.樣品中檢測物水平

  4.樣本可獲得性

  5.試劑盒關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)

  6.預(yù)算

  一、ELISA類型

  在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，首要是明確ELISA類型。實(shí)驗(yàn)人員可以結(jié)合自己待檢測物來明確試劑盒類型。一般試劑盒類型分為直接法、間接法、競爭法和雙抗體夾心法。下面詳細(xì)介紹：

  1.直接法：直接ELISA步驟最少，常用于分析對(duì)抗原的免疫反應(yīng)。

  2.間接法:間接ELISA是一個(gè)兩步過程，最適合確定樣本中的總抗體濃度。

  3.夾心ELISA（適用于大蛋白）利用匹配的抗體對(duì)，靈敏度比間接或直接ELISA高2-5倍。用于分析復(fù)雜樣品，因?yàn)榭乖跍y量前不需要純化。

  4.競爭性ELISA（適用于小蛋白質(zhì)）最適合檢測不能被兩種不同抗體結(jié)合的小抗原，例如夾心ELISA技術(shù)。

  二、實(shí)驗(yàn)物種及待檢樣品

  如果實(shí)驗(yàn)對(duì)象是人、小鼠及大鼠比較常見物種，選擇一個(gè)合適的試劑盒相對(duì)容易一些。如果檢測樣品比較稀有的雞、牛、猴物種，市面上還是比較少。如果需要的話，最好要對(duì)待檢物（如有種屬差異性）進(jìn)行同源性分析以及試劑盒的種屬交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)。

  對(duì)于樣品類型而言，一般的商業(yè)化試劑盒在正式上市銷售之前都經(jīng)過血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的驗(yàn)證。

  在選擇試劑盒之前，最好是詳細(xì)閱讀說明書。因?yàn)樵谀承┣闆r下樣品會(huì)存在感染因素。例如溶血血漿、含有高脂肪的樣本、細(xì)胞培養(yǎng)液或人抗屬抗體中含有胎牛血清等。通過閱讀供應(yīng)商說明書或直接進(jìn)行咨詢。如果您的樣品為組織和細(xì)胞裂解物，則需要謹(jǐn)慎的選擇試劑盒。

  三、樣品中檢測物水平

  為了降低目標(biāo)蛋白之外的其他成分（例如鹽離子、脂類、其他蛋白質(zhì)等），一般建議至少進(jìn)行2倍稀釋，也就是將1份樣品與1份稀釋液混合。如果對(duì)樣品濃度范圍沒有概念，最好先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，測試不同稀釋倍數(shù)下的結(jié)果，找到最佳稀釋倍數(shù)。除此之外，樣品中待檢測物含量遠(yuǎn)超試劑盒檢測范圍（標(biāo)曲范圍），需要根據(jù)樣品中目標(biāo)蛋白的大概濃度和試劑盒的檢測范圍，選擇合適的稀釋倍數(shù)。最后計(jì)算結(jié)果時(shí)，需要將測得的數(shù)值乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，才能得到樣品中目標(biāo)蛋白的真實(shí)濃度。

  四、樣本可獲得性

  一般而言，商業(yè)化試劑盒的樣本用量都在50ul或100ul，但也有一些供應(yīng)商的試劑盒樣品用量要求可少至于10ul。如果您待檢測樣品比較難獲取，則需認(rèn)證考慮試劑盒對(duì)樣品用量的需求。如果樣品本身就比較少，且需要做多因子檢測時(shí)更需要謹(jǐn)慎選擇。

  五、試劑盒關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)

  ELISA試劑盒關(guān)鍵的技術(shù)參數(shù)包括板內(nèi)差異性、板間差異性、批間差異性、重復(fù)性、特異性及交叉反應(yīng)性、回收率等。如果經(jīng)常開展ELISA實(shí)驗(yàn)，建議使用同一廠家試劑盒，這樣可以保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可比性和重復(fù)性。

  六、預(yù)算

  預(yù)算是選購ELISA試劑盒比較關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。國際公認(rèn)知名品牌（進(jìn)口試劑盒）質(zhì)量比較可靠，文獻(xiàn)引用較多。由于知名品牌（進(jìn)口）運(yùn)輸成本較高，試劑盒價(jià)格也較高。對(duì)于國內(nèi)優(yōu)質(zhì)品牌試劑盒也是不錯(cuò)的選擇，因因省去不少物流和報(bào)關(guān)中間費(fèi)用，與進(jìn)口試劑盒價(jià)格上相比也有較大的優(yōu)惠，而且能夠提供靈活的包裝規(guī)格，比較適合國情。

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